基于此现状，本研究用新西兰兔的下颌切牙进行即刻种植即刻修复的动物模型构建，通过动物实验初步验证T2DM个体即刻种植即刻修复的可行性及预后特征，并分析其组织学改建特点，希望为T2DM患者进行即刻种植即刻修复的临床试验设计提供参考依据。

（2）仪器与设备：光纤种植机（Nobel，瑞典），Micro-CT扫描仪（西门子Inveon，德国），硬组织磨片机（EXAKT 400CS，德国），Epoch 全波长酶标仪（Bio-Tek，美国），反转录热循环仪（Eppendorf，德国），实时定量 PCR仪（Bio-rad，美国），超速离心机（Eppendorf，德国）。

（2） 即刻种植即刻修复及术后维护：实验动物术前8 小时禁食禁水，肌肉注射陆眠宁（0.1 g/mL，0.1 mL/kg体重）镇静后，耳缘静脉推注3%戊巴比妥钠溶液（0.3 mL/kg体重），铺单消毒，下颌切牙区注射0.3 mL盐酸阿替卡因肾上腺素注射液局部麻醉，在避免牙槽骨（尤其是唇侧骨壁）损伤的前提下，牙挺挺松后拔除下颌切牙。生理盐水冷却下，使用种植机对一侧拔牙窝逐级预备窝洞， 在35 N·cm植入扭矩下植入带有光滑颈圈的4.1 mm×12.0 mm软组织水平种植体（Straumann， 瑞士）， 光滑颈圈顶部平齐牙槽骨平面，戴螺钉固位临时修复体， 并加力至15 N·cm， 若加力至15 N·cm种植体无松动、唇侧骨板未见明显开裂则判定为手术建模成功。临时修复体使用复合树脂模拟实验兔下颌切牙外形制作后口内戴入，且进行高度抛光。缝合伤口，术区局部注射0.3 mL地塞米松+庆大霉素混合溶液（ 地塞米松：5 mg/mL，庆大霉素：40 000 u/mL，注射前1:1混匀），术后即刻肌注0.5 mL 20 000 u/mL庆大霉素。调磨上颌切牙至无咬合接触，术后3 天每天肌肉注射0.5 mL 20 000 u/mL青霉素预防感染。手术过程见图1。

术后每周复查，调磨上颌切牙至无咬合接触，并使用3%过氧化氢和生理盐水交替冲洗（图2）。若局部出现感染迹象（牙龈红肿、探诊触碰出血等），则清理消毒，同时在龈沟内注射盐酸米诺环素软膏，1 周后观察有无好转。若实验兔始终愈合不佳、并出现种植体松动，则判定为种植体失败。口腔种植术后1 个月、2 个月、3 个月随机在T2DM组及对照组内各抽取3 只实验兔处死取材，取材组织为带有种植体的下颌骨部分。

（1）Micro-CT： 将所有样本修剪至25 mm×20 mm×10 mm大小，确保种植体周围骨组织完整性，并彻底去除表面的软组织，使用4%多聚甲醛固定液于4℃条件下固定48 小时以上，Micro-CT高分辨率模式下扫描样本。观察样本与种植体长轴平行的纵切面，然后从种植体光滑颈圈与体部边界开始，将种植体表面向四周扩散。

（2）组织切片染色：对2 组样本脱水、浸塑、包埋和硬组织切片，最终打磨样本切片至30~40 μm。所有切片脱塑处理，并对2 组各时间段的样本切片均进行甲苯胺蓝染色及苦味酸- 品红（Van Gieson，VG）染色，用中性树脂封片。

2 组实验兔在T2DM动物模型构建及验证过程中体重及空腹血糖监测结果如图4 所示，T2DM组新西兰兔在高糖高脂饲料喂养期间表现为体重及空腹血糖缓慢增长，而在给药（第9 周）后，因实验兔的胰岛B细胞在小剂量、多次注射STZ后受到破坏，其胰岛素分泌和血糖调节功能受损，空腹血糖明显升高，同时出现体重减轻，多饮、多食、多尿的表现，与T2DM患者发病初期相关体征类似。

术后2 组实验兔（共20 只，T2DM组与对照组各10 只）在定期应用抗生素的情况下伤口愈合良好，2 组各有1 只实验兔种植体未发生骨结合，判定为种植体失败，2 组实验兔即刻种植即刻修复的种植体留存率均为90%；复查中通过肉眼观察可发现T2DM组实验兔与对照组相比种植体周牙龈袖口相对松弛，角化龈宽度相对不足，同时与对照组相对坚韧的牙龈相比，T2DM组种植体周软组织相对松软红肿，存在疑似炎症表现（图5）。

Micro-CT扫描重建的结果如图6 所示， 与对照组相比，T2DM组样本在种植体植入后早期（1 个月、2 个月）种植体周骨质明显少于对照组，而在3 个月种植体周骨质及骨量与对照组基本相近，这提示T2DM组新西兰兔在即刻种植即刻修复后，早期成骨及骨结合较慢，需要延长愈合时间以达到良好的愈后。

种植体周ROI内微观结构分析的相关结果如图7 所示。术后1 个月，T2DM组Tb.Sp显著高于对照组，BV/TV、Tb.N、Tb.Th均显著低于对照组；术后2 个月，T2DM组Tb.Sp显著高于对照组，BV/TV与Tb.Th显著低于对照组，而Tb.N2 组间并无显著差异；术后3 个月，T2DM组与对照组在评价骨微观结构的各项参数对比中均无显著差异。结果提示T2DM组实验兔在即刻种植即刻修复后早期种植体周骨组织形成上显著低于全身健康实验兔，而在种植体植入后3 个月两者无显著差异。

组织学切片分析、测量过程使用Image J软件（national institutes of health，美国）进行，所有数据均测量、计算3遍取平均值。术后1个月所取2组实验兔的样本组织学染色结果如图8A所示。切片甲苯胺蓝染色后可观察到浅蓝色背景下种植体周被染成浅蓝色的骨组织，其中新生牙槽骨的颜色与一直存在的旧骨相比颜色较浅，对比2组切片染色结果可见T2DM组实验兔在即刻种植即刻修复后，新骨形成较慢，且骨质较差，对照组种植体周骨量比T2DM组更多，同时骨小梁更厚、密度更大，其骨质也显著优于T2DM组。对切片甲苯胺蓝染色结果进行骨体积率分析，对比2 组实验兔在即刻种植即刻修复后新生骨的生长情况，结果如图所示，即刻种植即刻修复后的早期（1 个月），T2DM组新生骨形成显著低于对照组（P<0.05），提示T2DM组实验兔术后早期成骨能力差，新生骨形成缓慢，并对骨结合有一定影响；进一步在样本切片VG染色结果中对骨结合率进行分析，镜下可观察到对照组种植体周呈橘红色的骨组织明显较T2DM组多，其骨结合形成情况显著优于T2DM组。对2 组样本硬组织切片的VG染色结果进行骨结合率分析对比后发现， 即刻种植即刻修复后1 个月内T2DM组实验兔的种植体骨结合率显著低于对照组（P<0.01），且种植体周骨量相对较低。